近日，中国农业科学院农业质量标准检测技术研究所畜产品质量安全创新团队围绕高值乳品鉴别开发了一系列快速、定量和多重检测方法，为高值乳品市场监管提供了技术支撑。相关研究成果发表在《食品化学（Food Chemistry）》、《食品农业科学杂志（Journal of Science of Food and Agriculture）》、《食品科学技术（LWT- food science and technology）》、《食品工业科技》和《食品安全质量学报》上。

　　据陈爱亮研究员介绍，近年来，随着我国乳制品行业的快速发展，市场上出现了许多高值乳品，如被誉为“奶中之王”的山羊奶、“雪中之舟”的牦牛奶、“沙漠黄金”的骆驼奶、“奶中珍品”的马奶，以及只含有A2β酪蛋白的A2牛奶等。这些高值乳品有着更加优质的蛋白质和氨基酸组成、丰富的营养元素、更高的消化率、独特的风味以及保健作用等特点，受到越来越多消费者的青睐，因此价格也远高于普通的牛奶。但是这些高值乳品产量低，在利益的驱动下，国内外均出现了利用低价乳品如普通牛奶冒充高值奶的现象。这种乳品掺假现象不仅侵害了消费者的权利，同时也给牛奶过敏者带来了健康威胁，因此开发高值乳品鉴别方法刻不容缓。

　　团队首先针对不同物种乳品的现场快速鉴别需求，针对线粒体种属特异性基因设计扩增引物，开发了牦牛奶等重组酶聚合酶-核酸试纸条快速检测技术，该方法无需PCR等复杂仪器，只需要简单水浴或体温加热即可完成，配合团队开发的乳品DNA快速提取方法，可以在40分钟内完成牦牛奶的鉴定。同时为了符合农业领域检测低成本的要求，团队设计了基于C3终止加尾引物，避免了现有核酸试纸条技术中昂贵抗原抗体的使用，同时还提高了检测效率。

　　图1 牦牛奶鉴定试纸条原理示意图

　　其次，为了解决液态奶样品掺假定量检测的问题，团队开发了基于单拷贝核基因作为标志物，利用特异性基因与参考基因荧光定量PCR检测的Ct值之比，推断液态奶样品中待检牛奶占总牛奶的含量，分别建立了驴奶、骆驼奶的含量测定方法。该方法无需预先知道掺假乳品种类，一次分析即可确定高值奶的纯度，避免传统PCR方法因为沾染可能造成误判的现象，也为根据掺假程度进行合理执法提供了技术依据。

　　图2 骆驼奶样品纯度检测标准曲线

　　最后，围绕高值奶多重鉴别，团队还开发了基于实时荧光LAMP技术的微流控芯片产品。通过提前将各物种奶环介导等温扩增引物固定到芯片上，检测时只需要把提取DNA加到芯片上，通过上机检测，可在90分钟完成多个样品多个指标的同时检测。

　　图3 实时荧光LAMP微流控芯片用于高值乳品多重鉴别

　　此外，针对近几年风靡国内市场的进口A2牛奶和奶粉，国内各大乳企也纷纷开始选育A2奶牛，上市各种国产A2奶产品，其价格是普通牛奶或奶粉的数倍，同样因产量少价格高面临着掺假鉴别的需求。围绕乳企A2奶牛选育和市场A2乳品鉴别的需求，团队针对CSN基因突变位点，设计一对可以分别特异扩增A2和A1基因的PCR引物，同时设计了牛内参引物作为方法质控对照，利用ARMS-PCR技术，成功开发了A2奶牛鉴定和A2牛奶鉴别的荧光定量PCR试剂盒。

　　图4  A1A2牛奶双重鉴别扩增曲线及对比测序结果图

　　上述研究得到“十三五”国家重点研发计划“重要食品真实性多维鉴别检测关键技术研究(2017YFC1601700)”等项目资助。

　　原文链接：

　　（1）https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2021.129348

　　（2）https://doi.org/10.1016/j.lwt.2020.109038

　　（3）https://doi.org/10.1002/jsfa.10382

　　（4）https://doi.org/10.13386/j.issn1002-0306.2019120100

　　（5）https://doi.org/10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2020.01.023